Diabetologia：激活但机能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失口内自身抗本体到消失1HG肝炎药理学病征的令人满意率在幼儿时期就有很好的叙述，多个口内自身抗本体阳性的幼儿中会有70%在血清叠加后10年末患肝炎，而随访15年的幼儿这一比率减低到84%。相尤其之下，占药理学1HG肝炎一半以上的HG1HG肝炎的发病机制还没有得不到充分的研究工作。

越来越多的人开始用到分期该系统来度量1HG肝炎的令人满意：个本体在消失多种口内自身抗本体时进入第1期中，消失食欲异常时进入第2期中，消失病征时进入第3期中。一些多发口内自身抗本体阳性的个本体，在1期和2期，令人满意较更慢，并转型为发病的1HG肝炎。我们之前叙述了一第三组在首次侦测到多种口内自身抗本体样本后至少10年无肝炎的极更慢令人满意者，这第三组患儿人数少，但特征十分明确。随后，我们找到口内自身抗原特异性CD8+T蛋白反应在令人满意快速的患儿中会基本不存在，但在最近发病和由来已久的肝炎患儿中会很较易侦测到。这似乎表明，与令人满意患儿相尤其，这些患儿自身免疫反应的调节大幅提高。

早期研究工作表明，尽管调节性T蛋白(Treg)数目长时间，但肝炎患儿存在一些功用缺陷，其中会包括对IL-2的反应能力减缓。此外，肝炎患儿中会的effectCD4+T蛋白似乎对调节极具抵抗性，平庸为effectT蛋白的诱导减弱，自然地产生的Treg和本体外产生的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T蛋白中会IL-2反应减弱。本研究工作的目的是叙述了CD4+调节性T蛋白(Treg)在一个大极快速令人满意者中会的特征，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

分析方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的纵向研究工作，在21岁以下确诊的患儿亲戚中会安全检查1HG肝炎的危险各种因素。我们之前叙述了长期快速令人满意者的特征，他们保持多重口内自身抗本体阳性超过10年，但没有消失肝炎的药理学病征，更慢性或非展开性自身免疫。随后，10名继续保持无肝炎并愿意透过大量肝脏样本的快速令人满意者归入T和B蛋白功用归纳。在目前的研究工作中会，8名更慢令人满意者(SP第三组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身抗本体阳性。所有的旁观者都正处于1HG肝炎令人满意的1期，尽管一些人随后失去了口内自身抗本体对某些抗原的抽血，然而，一名患儿早已正处于2期至少6年，但没有消失药理学病征，一名患儿被确诊为肝炎，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中会对该酪氨酸展开了单独审核。分离外周血单个核蛋白(PBMCs)，采用多参数流式蛋白忍术和T蛋白诱导试验审核酪氨酸中会Treg的Hz、表HG和功用。用到FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和回归)展开无都由聚类归纳，审核Treg表HG。

结果：与身心健康酪氨酸相尤其，来自更慢令人满意本体的心灵CD4+T蛋白的都由聚类标示出，激活命的心灵CD4+ TregHz减低，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)传达减低有关。一名HbA1c上升时的患儿与令人满意快速者和冗余的依此第三组相尤其，Treg谱有所大同小异。功用归纳表明，与身心健康酪氨酸相尤其，来自快速令人满意本体的Treg介导的CD4+effectT蛋白诱导明显受损。平庸为对effectCD4+T蛋白CD25和CD134传达的诱导减低。

平面图1 深入的表HG归纳标示出，CD4+Treg亚HG在更慢令人满意表头中会减低。由FlowSOM生成的Treg一楼，聚集在来自所有酪氨酸的活命CD4+CD45RA -蛋白上。根据记号物传达检验出10个元簇:心灵T蛋白_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T蛋白;HLA-DR + GITR +心灵T蛋白;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用到9个大同小异Treg记号生成的10个元簇的MST。每个节点象征性一个战略性(100个战略性)，大得多的元战略性(10个元战略性)在节点第三组周围打磨。每个节点中会的面包平面图对此单个记号的传达档次。(b)每个元聚类的热平面图，以标示出整本体记号传达。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)生成平面图，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说丰度为每个metacluster箱新线平面图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP第三组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T蛋白(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T蛋白(l)。紫色橘色象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用到CITRUS的预测模HG推测，TregHz的减低是令人满意快速的图案。分级相关联(a - f)和柑橘归纳(g-k)尤其SP旁观者和冗余的HD旁观者在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的象征性性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR传达展开分离，建模FlowSOM群本体。(b) HD(网纹)和SP(杂色)第三组以及酪氨酸SP 606(紫色)中会CD25+ cd127的Hz汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联子集的箱新线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达风速填充，橘色突出的簇被比对为SP和HD表头之间的大同小异。(j)箱新线平面图标示出了在SP(杂色)和HD(灰点)第三组中会，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的一般来说丰度(比率)。(k)直方平面图标示出每个簇的表HG(粉红色)和Treg记号一般来说传达与氛围传达(白色);上列，存储器Treg_3;请注意一行，存储器Treg_4。氛围与所有其他簇中会记号的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验

平面图3 与身心健康献血者相尤其，令人满意快速者心灵treg的GITR减低。每个心灵CD4+T蛋白元簇(心灵T蛋白_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T蛋白;HLA-DR + GITR +心灵T蛋白;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个传达记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的传达热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR传达联接，标示出直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon配对记号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有酪氨酸包括，p< 0.05(白色)酪氨酸SP 606和冗余的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR传达，从分级相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(紫色)联接，标示出直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩检验

平面图4 来自快速令人满意的CD4+ treg蛋白控制effectCD4+T蛋白的能力减缓。SP第三组用白色的新线和橘色对此，HD第三组用白色的新线和橘色对此，紫色的新线/橘色对此酪氨酸sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被记号为CFSE, Treg按观察的比率氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠活命化蛋白，培植3过后展开流式蛋白忍术侦测。(a-d)与CD4+反之亦然者一般来说应的treg培植(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱导总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导总和。用到阳性依此(激活命的响应蛋白不含treg)计算诱导总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

平面图5 effectCD4+T蛋白对快速令人满意的T蛋白活命化的诱导更为脆弱。SP第三组用白色的新线和橘色对此，HD第三组用白色的新线和橘色对此，紫色的新线/橘色对此酪氨酸sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel记号，treg按观察的比率氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠活命化蛋白，培植3过后展开流式蛋白忍术(CD25反染)和蛋白因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱导百份(b)。(c,d) CD25诱导百份(c)和CD134诱导百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中会的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

论断：我们给出的论断是，来自快速令人满意子的活命化心灵CD4+Treg在GITR传达中会得不到了扩展和多样，强调了促使研究工作Treg在1HG肝炎风险个本体中会的表型的必要性。

标题出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28