Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者成效缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失人棒状内自身抗棒状到消失1HG癌症针灸病症的实质性率在幼儿时期就有不错的说明了，多个人棒状内自身抗棒状无病症的幼儿之前有70%在血清变换后10年内患上癌症，而随访15年的幼儿这一需求量减极多到84%。相比较于之下，占针灸1HG癌症一半以上的HG1HG癌症的发病的系统还不能得到充分的研究工作。

越来越多的人开始用到分过渡阶段系统来定义1HG癌症的实质性：个棒状在消失多种人棒状内自身抗棒状时带入第1过渡阶段，消失浓度所致时带入第2过渡阶段，消失病症时带入第3过渡阶段。一些多发人棒状内自身抗棒状无病症的个棒状，在1期和2期，实质性较快，并发展为发病的1HG癌症。我们之前说明了了一两组在首次探测到多种人棒状内自身抗棒状样品后至极多10年无癌症的更慢实质性者，这两组病变人数极多，但特点十分明确。随后，我们发现人棒状内自身肝细胞选择性CD8+T细胞会质子化在实质性比起慢的病变之前原则上不长期存在，但在最近发病和近十年长期存在的癌症病变之前很难以探测到。这可能会断定，与实质性病变相比较于，这些病变自身免疫质子化的缓冲减慢。

早期研究工作断定，尽管缓冲性T细胞会(Treg)需求量正常，但癌症病变长期存在一些系统局限性，其之前包括对IL-2的质子化灵活性提高。此外，癌症病变之前的现象CD4+T细胞会可能会对缓冲更是具抵抗性，观感为现象T细胞会的依赖性减弱，自然地造成的Treg和棒状外造成的依赖性Treg，以及肝细胞经历的CD4+T细胞会之前IL-2质子化减弱。本研究工作的最终目标是说明了了CD4+缓冲性T细胞会(Treg)在一小群极比起慢实质性者之前的特点，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

作法：BOX研究工作是一项以人群基础上的纵向研究工作，在21岁此表确诊的病变弟女之前安全检查1HG癌症的危险因素。我们之前说明了了近十年比起慢实质性者的特点，他们保有多重人棒状内自身抗棒状无病症最极多10年，但不能消失癌症的针灸病症，慢性或非外阴自身免疫。随后，10名之前保有无癌症并想获取大量血液样品的比起慢实质性者不属于T和B细胞会系统归纳。在现在的研究工作之前，8名慢实质性者(SP两组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的人棒状内自身抗棒状无病症。所有的发起者都受制于1HG癌症实质性的1期，尽管一些人随后无法支配了人棒状内自身抗棒状对某些肝细胞的无病症质子化，然而，一名病变早就受制于2期至极多6年，但不能消失针灸病症，一名病变被诊断为癌症，该受试者72岁，在采集实验样品时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳之前对该NADP展开了单独评核。分离出来外周血单个连锁质子化细胞会(PBMCs)，使用多参数流式细胞会绝技和T细胞会依赖性试验中评核NADP之前Treg的增益、表观和系统。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)展开无指导聚类归纳，评核Treg表观。

结果：与生活品质NADP相比较于，来自慢实质性棒状的无意识CD4+T细胞会的指导聚类标示出，作用于的无意识CD4+ Treg增益减极多，与糖皮质激素依赖性的TNFR涉及细胞会(GITR)坚称减极多有关。一名HbA1c下降时的病变与实质性比起慢者和意味着的相异两组相比较于，Treg谱各有不尽相同。系统归纳断定，与生活品质NADP相比较于，来自比起慢实质性棒状的Treg介导的CD4+现象T细胞会依赖性值得注意受损。观感为对现象CD4+T细胞会CD25和CD134坚称的依赖性减极多。

所示1 深入的表观归纳标示出，CD4+Treg亚HG在慢实质性配置文件之前减极多。由FlowSOM生成的Treg室，挤满在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据上面物坚称鉴定出10个元簇:无意识T细胞会_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞会;HLA-DR + GITR +无意识T细胞会;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用到9个不尽相同Treg上面生成的10个元簇的MST。每个终端象征性一个坦克部队(100个坦克部队)，更是大的元坦克部队(10个元坦克部队)在终端两组四周上色。每个终端之前的点心所示坚称单个上面的坚称级别。(b)每个元聚类的热所示，以标示出整棒状上面坚称。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成所示，以及FlowSOM辨认的每个元簇的孔洞。(e-l)相比较丰度为每个metacluster装之前央线所示(丰度> 0.05%)确定为HD和SP两组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞会(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞会(l)。橘色格子象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写字母秩鉴定。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用到CITRUS的预测模HG证实，Treg增益的减极多是实质性比起慢的标志。分级暂时性(a - f)和柑橘归纳(g-k)比起SP发起者和意味着的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞会上的歧异。(a)未成熟CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的象征性性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR坚称展开分离出来，各种类型FlowSOM群棒状。(b) HD(网纹)和SP(蓝点)两组以及NADPSP 606(橘色)之前CD25+ cd127的增益连锁质子化心内容所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性弟集的装之前央线所示;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3坚称强度填充，箭头突出的簇被辨认为SP和HD配置文件间的不尽相同。(j)装之前央线所示标示出了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组之前，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相比较丰度(需求量)。(k)直方所示标示出每个簇的表观(粉红色)和Treg上面相比较坚称与背景坚称(蓝色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。背景与所有其他簇之前上面的坚称有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写字母秩鉴定

所示3 与生活品质献血者相比较于，实质性比起慢者无意识treg的GITR减极多。每个无意识CD4+T细胞会元簇(无意识T细胞会_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞会;HLA-DR + GITR +无意识T细胞会;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个坚称上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的坚称热所示(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR坚称相联，标示出直方所示(c)和连锁质子化心内容所示(d)。Wilcoxon配对大写字母秩和鉴定，p< 0.07(橘色)所有NADP包括，p< 0.05(蓝色)NADPSP 606和意味着的HD不包括在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR坚称，从分级暂时性，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)相联，标示出直方所示(e)和连锁质子化心内容所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写字母秩鉴定

所示4 来自比起慢实质性的CD4+ treg细胞会支配现象CD4+T细胞会的灵活性提高。SP两组用蓝色的之前央线和格子坚称，HD两组用灰色的之前央线和格子坚称，橘色的之前央线/格子坚称NADPsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(；也者)被上面为CFSE, Treg按判读的需求量溶液。用抗CD3 /28微珠还原细胞会，培植3同月展开流式细胞会绝技探测。(a-d)与CD4+；也者相比较应的treg培植(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性倍数。用到无病症相异(作用于的响应细胞会内含treg)量度依赖性倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

所示5 现象CD4+T细胞会对比起慢实质性的T细胞会还原的依赖性更是敏感。SP两组用蓝色的之前央线和格子坚称，HD两组用灰色的之前央线和格子坚称，橘色的之前央线/格子坚称NADPsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel上面，treg按判读的需求量溶液。用抗CD3 /28微珠还原细胞会，培植3同月展开流式细胞会绝技(CD25反染)和细胞会因弟归纳。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性百分率(b)。(c,d) CD25依赖性百分率(c)和CD134依赖性百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植之前的坚称。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

论点：我们得出的论点是，来自比起慢实质性弟的还原无意识CD4+Treg在GITR坚称之前得到了扩展和充沛，强调了进一步研究工作Treg在1HG癌症可能会个棒状之前的异质性的必要性。

书名中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28