Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型哮喘患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到呼吸道自身胰岛素到用到1DF冠心病临床研究病因的困难重重领军在青少年一时期就有很好的描述，多个呼吸道自身胰岛素中性的青少年里面有70%在胰岛素转换成后10年内患上冠心病，而随访15年的青少年这一数目减少到84%。相比之下之下，%临床研究1DF冠心病一半以上的DF1DF冠心病的确诊机制还没有想得到充分的数据分析。

越来越多的人开始用于分期系统来定义1DF冠心病的困难重重：有机体在用到多种呼吸道自身胰岛素时踏入第1前期，用到皮质醇所致时踏入第2前期，用到病因时踏入第3前期。一些多发呼吸道自身胰岛素中性的有机体，在1期和2期，困难重重较近于快，并发展为确诊的1DF冠心病。我们之前描述了一第三组在首次测定到多种呼吸道自身胰岛素样本后多于10年无冠心病的近于近于快困难重重者，这第三组患儿人数少，但相似性非常一致。随后，我们发现呼吸道自身复合物特异性CD8+T细胞内加成在困难重重缓近于快的患儿里面基本不存在，但在近来确诊和长年存在的冠心病患儿里面很非常容易测定到。这可能表明，与困难重重患儿相比之下，这些患儿自身免疫加成的恒定增强。

早期数据分析表明，尽管恒定性T细胞内(Treg)生产量正常，但冠心病患儿存在一些特性瑕疵，其里面除此以外对IL-2的加成灵活性增高。此外，冠心病患儿里面的不稳定性CD4+T细胞内可能对恒定更加具抵抗性，乏善可陈为不稳定性T细胞内的减缓西移动，自然造成了的Treg和人体内造成了的诱导Treg，以及复合物经历的CD4+T细胞内里面IL-2加成西移动。本数据分析的目的是描述了CD4+恒定性T细胞内(Treg)在一小群近于缓近于快困难重重者里面的相似性，他们的年长为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

工具：BOX数据分析是一项以年轻人为基础的纵向数据分析，在21岁表列确诊的患儿亲属里面检查1DF冠心病的危险各种因素。我们之前描述了长年缓近于快困难重重者的相似性，他们保持多重呼吸道自身胰岛素中性超过10年，但没有用到冠心病的临床研究病因，近于快性或非神经性自身免疫。随后，10名继续保持无冠心病并愿意提供大量血液样本的缓近于快困难重重者纳入T和B细胞内特性分析。在现今的数据分析里面，8名近于快困难重重者(SP第三组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的呼吸道自身胰岛素中性。所有的与会者都西北面1DF冠心病困难重重的1期，尽管一些人随后得不到了呼吸道自身胰岛素对某些复合物的中性加成，然而，一名患儿已经西北面2期多于6年，但没有用到临床研究病因，一名患儿被诊断为冠心病，该实验者72岁，在通过注意到实验样本时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里面对该NADPH同步进行了单独评估。分立外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内心法和T细胞内减缓飞行测试评估NADPH里面Treg的频领军、表DF和特性。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)同步进行无委派聚类分析，评估Treg表DF。

结果：与健康NADPH相比之下，来自近于快困难重重体的失忆CD4+T细胞内的委派聚类说明了，激活的失忆CD4+ Treg频领军减少，与糖皮质激素诱导的TNFR关的蛋白(GITR)解读减少有关。一名HbA1c增高的患儿与困难重重缓近于快者和比如说的对照第三组相比之下，Treg谱各不相同。特性分析表明，与健康NADPH相比之下，来自缓近于快困难重重体的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞内减缓明显受损。乏善可陈为对不稳定性CD4+T细胞内CD25和CD134解读的减缓减少。

绘出1 深入的表DF分析说明了，CD4+Treg亚DF在近于快困难重重路由表里面减少。由FlowSOM填充的Treg寝室，汇聚在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标上物解读鉴定出10个元簇:失忆T细胞内_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞内;HLA-DR + GITR +失忆T细胞内;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用于9个完全相同Treg标上填充的10个元簇的MST。每个端口都有一个坦克部队(100个坦克部队)，更加大的元坦克部队(10个元坦克部队)在端口第三组周围打磨。每个端口里面的饼绘出声称单个标上的解读级别。(b)每个元聚类的热绘出，以说明了整体标上解读。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)填充绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较轻元素为每个metacluster装线或绘出(轻元素> 0.05%)确认为HD和SP第三组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞内(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞内(l)。深蓝色左上角都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推小写字母秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 用于CITRUS的预测模DF声称，Treg频领军的减少是困难重重缓近于快的标记。分级制度关的联(a - f)和柑橘分析(g-k)来得SP与会者和比如说的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞内上的相似之处。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团体的都有性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读同步进行分立，模拟FlowSOM小团体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第三组以及NADPHSP 606(深蓝色)里面CD25+ cd127的频领军综合绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+关的联长子集的装线或绘出;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)油菜簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读低压着色，对角突出的簇被识别为SP和HD路由表密切关系的完全相同。(j)装线或绘出说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组里面，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相较轻元素(数目)。(k)缩放说明了每个簇的表DF(粉红色)和Treg标上相较解读与着重解读(蓝色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。着重与所有其他簇里面标上的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推小写字母秩检验

绘出3 与健康献血者相比之下，困难重重缓近于快者失忆treg的GITR减少。每个失忆CD4+T细胞内元簇(失忆T细胞内_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞内;HLA-DR + GITR +失忆T细胞内;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个解读标上的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的解读热绘出(sp606不除此以外在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇里面所有HD(蓝灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR解读串联，说明了缩放(c)和综合绘出(d)。Wilcoxon以此类推小写字母秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有NADPH除此以外，p< 0.05(蓝色)NADPHSP 606和比如说的HD不除此以外在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR解读，从分级制度关的联，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)串联，说明了缩放(e)和综合绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推小写字母秩检验

绘出4 来自缓近于快困难重重的CD4+ treg细胞内操纵不稳定性CD4+T细胞内的灵活性增高。SP第三组用蓝色的线或和左上角声称，HD第三组用红色的线或和左上角声称，深蓝色的线或/左上角声称NADPHsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(应以答者)被标上为CFSE, Treg按注意到的数目氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再生细胞内，培植3天后同步进行流式细胞内心法测定。(a-d)与CD4+应以答者相较应以的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应以答者培植。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE减缓%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓%-。用于中性对照(激活的响应以细胞内不含treg)计算减缓%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

绘出5 不稳定性CD4+T细胞内对缓近于快困难重重的T细胞内再生的减缓更加敏感。SP第三组用蓝色的线或和左上角声称，HD第三组用红色的线或和左上角声称，深蓝色的线或/左上角声称NADPHsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(应以答者)被cfsel标上，treg按注意到的数目氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再生细胞内，培植3天后同步进行流式细胞内心法(CD25反染)和细胞内因长子分析。HD Treg与HD、SP或sp606应以答者共同完成培植。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE减缓百分领军(b)。(c,d) CD25减缓百分领军(c)和CD134减缓百分领军(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在浙大里面的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

结论：我们得出的结论是，来自缓近于快困难重重长子的再生失忆CD4+Treg在GITR解读里面想得到了扩展和丰富，强调了进一步数据分析Treg在1DF冠心病风险有机体里面的异质性的不足之处。

原文引自：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28